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DH5α 感受态细胞说明书

  • 产品货号:CS-G001
  • 产品价格:电议
  • 产品产地:进口、国产
  • 包装类型:瓶装
  • 采购热度:6841
  • 库存:100
  • CAS号:
  • 方法:细胞
  • 含量:
  • 品牌名称:莼试
  • 分子式:
  • 分子量:

简介内容:DH5α 感受态细胞品牌现货供应,公司产品仅用于科研。

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标签:DH5α 感受态细胞说明书 DH5α 感受态细胞厂家 

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以下是感受态细胞的订购信息:
产品名称 DH5α 感受态细胞
规格1 100ul*20
规格2 100ul*100
使用说明:
1. 取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
2.待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30min。
3. 42℃热击45sec,然后快速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min,该过程不要摇动离心管。
4.每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床, 150 rpm振荡培养45~60min使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12~16h。

DH5α 感受态细胞培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。

DH5α 感受态细胞操作方法  
1.0.2cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。  
2.取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟,待其融化,加入1-5ug质粒DNA(质粒体积不大于6ul,最好用试剂盒抽提,双蒸水溶解),用手拨打管底混匀,立即插入冰中,用200ul枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中,盖上杯盖,空管保留待用。  
3.启动电转仪,设置参数:C=25uF,PC=200ohm,V=2400V(此参数为Biorad推荐,使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中,加入700ul无抗生素的LB并转移到感受态空管中,28℃振荡培养2~3小时。  
4.6000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50ug/mlkan时,28℃培养48h即可;平板中同时加入50ug/mlkan,20ug/mlrif时,需28℃培养60h;如果使用的平板含有50ug/mlrif则需要28℃培养72-90h)。 

原创作者:上海莼试生物技术有限公司

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