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亮氨酸氨基肽酶(Leucine Aminopeptidase, LAP)试剂盒微量法100管/96样

  • 产品货号:CS-01S63570
  • 产品价格:电议
  • 产品产地:进口、国产
  • 包装类型:100管/96样
  • 采购热度:4968
  • 库存:20
  • CAS号:
  • 方法:微量法
  • 含量:
  • 品牌名称:莼试
  • 分子式:
  • 分子量:

简介内容:亮氨酸氨基肽酶(Leucine Aminopeptidase, LAP)试剂盒质量可靠、价格优惠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点。

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标签:亮氨酸氨基肽酶(Leucine Aminopeptidase  LAP)试剂盒 

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产品名称

检测方法

规格

货号

亮氨酸氨基肽酶(Leucine Aminopeptidase, LAP)试剂盒

微量法

100/96

CS-0163570

 注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:

LAP是一类能水解肽链N-末端为亮氨酸的酶,广泛存在于肝、肾、胰等组织中,尤其以肝脏中含量最为丰富。各类肝病患者因肝细胞损伤,血清LAP的活性均有不同程度的升高,因此,血清LAP活性的检测能从不同侧面反映各种肝病的发生和发展。

商品介绍:

测定原理:

LAP分解L-亮氨酰对硝基苯胺生成对硝基苯胺,后者在405nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算LAP活性。

自备用品:

酶标仪/可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;

样本的前处理:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为1000~50001的比例(建议2000万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

LAP测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至405nm,蒸馏水调零。

2、将试剂二转移至试剂一中充分溶解(如较难溶解,可50℃水浴加热约30min促进溶解);在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

3、在微量石英比色皿或96孔板中加入50μL样本和150μL试剂一,混匀后立即记录405nm处初始吸光值A1 2min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1

注意事项:若ΔA大于0.5,需将酶液用提取液稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数。使A2-A1小于0.5,可提高检测灵敏度。

LAP活力单位的计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清(浆)LAP活力的计算:

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟生成1 nmol的对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAPnmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=205.8×ΔA

2、组织、细菌或细胞中LAP活力的计算:

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAPnmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAPnmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=205.8×ΔA÷W

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAPnmol/min /104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(2000×V样÷V样总) ÷T=0.103×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:对硝基苯胺摩尔消光系数,9.72×103 L / mol /cmd:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.05 mLV样总:加入提取液体积,1 mLT:反应时间,2 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g2000:细菌或细胞总数,2000万。

b.96孔板测定的计算公式如下

1、血清(浆)LAP活力的计算:

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟生成1 nmol的对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAPnmol/min /mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=411.5×ΔA

2、组织、细菌或细胞中LAP活力的计算:

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAPnmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷ (V样×Cpr) ÷T=411.5×ΔA÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAPnmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=411.5×ΔA÷W

3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

LAPnmol/min /104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(2000×V样÷V样总) ÷T=0.206×ΔA

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:对硝基苯胺摩尔消光系数,9.72×103 L / mol /cmd96孔板光径,0.5cmV样:加入样本体积,0.05 mLV样总:加入提取液体积,1 mLT:反应时间,2minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g2000:细菌或细胞总数,2000万。

注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原创作者:上海莼试生物技术有限公司

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