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Carrier RNA

  • 产品货号:CS-01F96502
  • 产品价格:电议
  • 产品产地:国产
  • 包装类型:盒装
  • 采购热度:410
  • 库存:100
  • CAS号:
  • 方法:
  • 含量:200μg|1mg
  • 品牌名称:莼试
  • 分子式:
  • 分子量:

简介内容:Carrier RNA现货供应,价格实惠。

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标签:Carrier RNA 200μg 1mg 

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货号

Carrier RNA

Carrier RNA

200μg|1mg

CS-01F96502

介绍

 Carrier RNA适用于大部分病毒RNA提取试剂盒,如的RNasy病毒RNA抽提试剂盒(离心柱式,货号:YTB4090)。一方面可以提高微量病毒RNA在纯化过程中与纯化柱的结合效率和洗脱效率,另一方面可以减少被可能存在的少量残留RNase降解的概率。Carrier RNA在病毒含量较少的情况下效果更明显。另外,常用的EP管的材料是聚丙烯,管壁上有静电,会吸附核酸,提取RNA时直接将Carrier RNA添加至裂解液中,Carrier RNA可以很好地被吸附到纯化柱上,有效地去除静电效应,提高洗脱效率。

Carrier RNA主要用于微量样本特别是病毒样本提取RNA时,帮助提升RNA的回收效率。本Carrier RNA为非病毒来源的RNA,不会干扰病毒RNA的后续检测。本Carrier RNA浓度为1μg/μL

注意事项:

本产品-20℃保存,一年有效;-80℃保存,两年有效。需避免反复冻融,初次使用时建议适当分装并于-20℃或更低温度密封保存。

操作时应小心,避免污染,请用RNase-free的枪头和EP管。建议戴一次性口罩操作。

对于样品量较少或提取病毒RNA时建议使用Carrier RNA;如果预期RNA量较大,可根据需要选择是否加入Carrier RNA

由于含有Carrier RNA,病毒RNA的浓度会不准确,建议使用qRT-PCR法进行定量。

使用说明:

每个病毒样品需要25μg Carrier RNA,直接添加至RNA抽提试剂盒中提供的裂解液中即可。例如,一个病毒样品,取3μLCarrier RNA (1μg/μl)添加至300μL的裂解液中,混匀后加入到病毒样品。

后续按照RNA抽提试剂盒的操作步骤进行RNA的提取。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

原创作者:上海莼试生物技术有限公司

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