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产品为蛋白原液形式。每种装于冻存管中，单抗质量为标示数量 5MG，体积根据其浓度不同略有不同。使用前可以根据自己实验需求进行稀释，溶剂建议用去离子无菌水(细胞培养用水)或者 PBS (细胞培养级)。不建议使用含有防腐成分的稀释液进行稀释，会增加细胞或者动物毒性。稀释前，计算加入多少体积溶剂，请参考购买蛋白浓度，或者询问我司，

举例，单抗蛋白原液蛋白浓度为 50mg/ml,对应 5MG 包装的蛋白原液体积为 5mg (质量) /50mg/ml(浓度)=0.1ML，实验需求蛋白浓度为 10mg/ml, 需要稀释倍数为 50/10=5, 则需要加入 0.4ML,即 400ul PBS 或者无菌去离子水即可。若给药量为固定质量值，比如单次给药 0.5MG，对应蛋白原液给药体积为 10ul，建议稀释后，提高给药体积降低误差，因为注射器或者移液器吸头残留会影响实验效果。稀释后的蛋白溶液，可于 2-8 度冷藏避光保存不超过 2 周，不建议长期储存。

避免反复冻融，每次冻融蛋白活性会降低约 5%左右

生物活性 (仅来自于公开文献，不保证其有效性)

描述	Cetuximab (anti-EGFR)是一种新型的分子靶向药物，是 EGFR 的抑制剂，同时也是人源 EGFR 单克隆抗体，与 EGFR 的胞外结合区域相互作用并抑制其受配体刺激。
靶点	EGFR (Cell-free assay) ：0.39 nM(Kd)
体外	Cetuximab (anti-EGFR)是一种重组嵌合的单克隆抗体，与人类 EGFR 受体具有高度亲和力。它与 EGFR 结合、抑制其受体相关的激酶的磷酸化合激活，从而导致细胞生长受到抑制、诱导细胞凋亡并减少 VEGF 的产生。Cetuximab 具有显著的单药抗肿瘤作用，在高表达 EGFR 蛋白的 NPC 细胞系中与 cisplatin 或 paclitaxel 具有加成作用，但对低表达 EGFR 的 NPC 细胞系 (如 CNE-2 和 C666- 1 )的作用甚微。 Cetuximab 阻止 EGFR 与配体的相互作用，抑制下游 RAS-ERK 激活。它能够促进内质网应激反应(ER stress) ，促使 ER 蛋白转运至细胞膜。它竞争性地抑制配体结合，抑制酪氨酸激酶激活，导致受体下调。除了竞争性抑制作用， cetuximab 与 EGFR 结合还可能引起受体内在化和被破坏。
体内	在小鼠移植瘤模型中， Cetuximab 能够增强几种化疗药物的抗肿瘤活性。它通过多种机制，包括抑制细胞周期的进展，将细胞周期阻滞在 G1 期、减少 S 期细胞数目来发挥其抗肿瘤作用。 Cetuximab 将细胞阻滞在 G1 期还能引起凋亡，通过诱导和激活相关促凋亡分子。单独给药或是与 carboplatin 协同给药能够引起肿瘤大小减少、转移扩散减少、减少细胞表面表达 EGFR、无 BRAF 和 K-ras 突变的 NCI-N87 肿瘤中 MVD。而在源自于 MKN-45 的肿瘤中作用甚微(其肿瘤表型是 BRAF 和 K-ras 行盛行，但胞质内 EGFR 弱表达)。

经典实验操作(仅来自于文献，供参考)

细胞实验

Objective: 细胞活力检测

Cells: HNE1 和 CNE2 细胞

Concentrations: 62.5, 125, 250, 500, 1000 或 2000 µg/ml

Incubation Time: 48 h

Method: 将细胞以 5 × 103 个细胞/孔的密度培养与平底 96 孔板。在 37℃、 5% CO2 的条件下孵育 24 小时后，将 200 μL 用培养基稀释成不同浓度的 cetuximab (62.5, 125, 250, 500, 1000 或 2000 µg/mL)和/或 cisplatin (0.25, 0.5, 1, 2, 4 或 8 µg/mL)加入每孔。处理 48 小时后，向每孔加入 10 μL CCK-8。孵育 2 小时后，通过检测 450 nm 处的吸收光值检测细胞活力。

Objective: To analyze the apoptosis of CRC cells

Cells: human DiFi CRC (Colorectal Cancer) cells

Concentrations: 10 pg/ml

Incubation Time: 72h

Method: To analyze the apoptosis, cells were seeded into 6-well plates (3 × 105 cells per well). After 24 h, cells were cultured both in the absence and presence of drugs. Cell death and apoptosis were assessed by cytofluorimetric analysis using PE-annexin V and 7-aminoactinomycin D (7-AAD) according to the manufacturer's instructions at different time points.

动物实验

Objective: Cetuximab 在小鼠胃癌模型中的抗肿瘤活性

Animal Models: 人类胃癌的裸鼠模型( CD-1/nu-nu mice )

Formulation: 0.9% NaCl

Dosages: 1 mg/kg

Administration: i.p.

Objective: To investigate the relationship between the EGFR levels and the responsiveness to cetuximab treatment in human cancer xenograft models

Animal Models: Female athymic, nude mice were implanted s.c. with ~1 mm3 tumor fragments

Formulation: PBS

Dosages: 0.25, 0.5 or 1 mg/mouse

Administration: i.p.

注：本产品仅供科研使用！

原创作者：上海莼试生物技术有限公司

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