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细胞悬浮培养几点注意事项操作步骤

阅读：4374 发布时间：2019/10/9 14:11:42

操作步骤

1．配制培养基

(1) 用于诱导水稻愈伤组织的培养基(N6)，见表4－1。

(2) 用于水稻悬浮培养的液体培养基，见表4－2。

按照培养基配方取各种药品，zui后用蒸馏水定容到所需体积。所配制的培养基经高压蒸汽灭菌后备用，固体琼脂培养基分装在250mL 的锥形瓶内，每瓶约分装30mL。

2．水稻种子的消毒

（1）将种子置于无菌的培养皿内，以体积分数95％的酒精消毒1～2min。

（2）取出后用无菌水冲洗2～3 遍。

（3）将种子放入25.0g/L 的次氯酸钠溶液中轻轻摇动后，浸泡60min 。

（4）取出后用无菌水冲洗，将次氯酸钠溶液充分洗净。

3．悬浮培养的开始：

当得到愈伤组织后，将其转人到AA 液体培养基中。注意愈伤组织块应小于3mm . 若组织块较大可用无菌解剖刀将其分割成小块。液体培养基分装在250mL 的锥形瓶内．接种完毕后将瓶口用封口膜封好，把培养瓶放到恒温摇床上进行震荡培养。调整摇床的旋转速度，使之为120r/min。培养温度为26℃，在黑暗中培养。

4. 接种

在超净工作台内，将灭菌后的水稻种子接到诱导愈伤组织的固体培养基上，每个培养瓶接5～10 粒种子。接种完毕后用封口膜将培养瓶封好，放在26℃的恒温培养箱中进行黑暗培养。

表4－1 用于诱导水稻愈伤组织的培养基

表4－2 用于水稻悬浮培养的液体培养基

植物细胞悬浮培养

5．悬浮培养物的保持

进行悬浮培养后要不断进行观察，由于培养物的继代培养与培养瓶内培养物的密度及细胞生长速度有关，因此当发现培养瓶中培养物密度较大时，应及时用无菌的吸管吸取部分培养物到一新的50mL 培养基中继续培养。同时还要及时淘汰一些大的组织团块和黄褐色的坏死组织。一般每隔4～7d 就要继代一次。

原创作者：上海莼试生物技术有限公司

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