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ELISA试剂盒在实验中经常会动到哪些常见问题

阅读:1210     发布时间:2019/1/14 13:45:36

ELISA试剂盒在实验中经常会动到哪些常见问题1. ELISA实验反应时间不同是由什么决定的?答:抗原与抗体、抗体与酶标抗体反应一般在37℃ 2h~3h达到高峰。时间太短,敏感性下降,时间太长,吸附的抗原或复合物(在这个温度下)可能脱落。酶底物反应时间的确定:一般采用15min~30min~45min。也可以标准阳性血清为准,随时测定其OD值,当达到规定的OD值时,即终止反应。2. 稀释的抗体如何保持其稳定性?3. 如何客服批间差异较大的缺陷?4. 显色体系的稳定性如何保持?5. 在试剂盒的研发过程中什么最重要?是抗体吗?(一) 显色淡,灵敏度偏低可能原因及解决方法?我们在做实验时,常会遇到elisa试剂盒显色淡灵敏度偏低的问题,以下是根据不同问题可能原因及其防止方法总结,仅供参考:可能原因及防止方法:1.孵育反应时间不足定时钟准确定时 2.洗涤时冲击力太大,洗涤液浸泡时间太长,洗涤次数增加减少洗涤冲击力,按说明书要求保留洗涤时间,准确记住洗涤次数3.显色剂滴加量不足或顺序颠倒,或混合后加入滴加显色液时,滴瓶垂直向下,持力均匀,滴速不宜过快,先加显色剂 A,反加显色剂B,不可将A、B液混合后加入4.显色剂反应时间不足准确定时5.蒸馏水水质有问题测定蒸馏水配制试剂对酶免疫法的影响6.试剂盒在运输途中时间太长,温度太高试剂盒置保温箱内运输,并放足够数量的冰块,尽量缩短运输时间7.试剂、样品用前未能平衡用前试剂、样品置室温平衡 30分钟左右。8.样品和NaN 3 防腐,抑制了酶的反应样品不能加 NaN 3 防腐9.试剂盒超过有效期超过效期试剂盒不要使用10.试剂开启时间过长长菌试剂开启后请尽量在短时间内用完11.移液器吸量不足,移液抽吸排放太快,吸头内壁挂液太多或内壁不清洁校正移液器,吸头要配套,每次装吸头要吻合紧密。移液不宜过快,排放应完全。吸头内壁要清洁,最好一次性使用。12.恒温箱温度不足37℃或水浴锅水温度不足37℃)放入反应板时注意培养箱温度,及时调整,孵育反应期间开启不宜太多,影响温度平衡。(二) 背景深,全部都有色可能原因及解决方法?1. 洗涤不充分,洗后为拍干,样品中有其他成分残留或酶标记物残留浓缩洗液准确配置;10倍浓缩洗涤液如有结晶则应让结晶于室温全部溶解后再量取稀释;充分洗涤,彻底拍干,加样或者加酶拍板的滤纸应弃去不用,不要反复使用,否则易造成污染。2. 样品污染。样本应新鲜采集或低温保存,防止污染。3. 培养箱温度超过37℃或反应时间过长调整培养箱温度,准确定时。4. 吸嘴重复使用,为洗净或消毒不彻底吸嘴尽可能一次性使用5. 蒸馏水污染使用新鲜的蒸馏水6. 酶等试剂混用。不同批号试剂勿混用。7. 一次实验的样本量过多,加样时间太长,导致实际反应时间延长。合理安排实验,避免几块酶标板同时加样。(三) 重复性不佳可能原因及解决方法?1. 样品数量多少不一,加样时间有长有短。重复某一样品时,加样时间尽可能与第一次接近。2. 保温时间不一致,洗涤条件不一致,操作人员不一致。重复测定标本,操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致,以排除这些因素造成的不一致的可能性。3. 加样量不一致。样本稀释前应充分混匀,尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴。。(四) 出现白板,阳性对照不显色可能原因及解决方法?1. 显色液变质更换新的显色液2. 洗涤液配置有误请按说明书所示稀释倍数配制。3. 未加酶结合物而认为已加入注意不要漏加4. 终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用每次加液前需看清标签。

原创作者:上海莼试生物技术有限公司

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