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奥叶兹基氏病病毒探针法荧光PCR检测试剂盒反应五要素

阅读:392     发布时间:2022/9/27 16:30:13

奥叶兹基氏病病毒探针法荧光PCR检测试剂盒反应五要素

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:

①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。

②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

奥叶兹基氏病病毒探针法荧光PCR检测试剂盒引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
脊髓小脑共济失调10抗体
蛋白激酶A锚定蛋白7抗体
腺苷三磷酸结合盒转运体12抗体
腺苷三磷酸结合盒转运体9抗体
三磷酸腺苷结合盒转运蛋白4抗体
肌动蛋白结合蛋白LIM3抗体
高尔基复合体相关蛋白1抗体
乙酰辅酶A羧化酶1ACCα抗体
腺嘌呤核苷酸转运蛋白1、2、3、4抗体
去整合素样金属蛋白酶12
磷酸化乙酰辅酶A羧化酶1ACCα抗体
膜粘连蛋白2受体抗体
晚期糖基化终末产物特异性受体抗体
ADCK5蛋白抗体
艾滋病病毒复制结合蛋白抗体
AFP4b蛋白抗体
HIV-1病毒复制结合蛋白2抗体
伴侣蛋白bc1同源复合体抗体
心肌锚蛋白重复结构域1抗体
抑制蛋白结构域蛋白1抗体
抑制蛋白结构域蛋白2抗体
抑制蛋白结构域蛋白3抗体
抑制蛋白结构域蛋白4抗体
雌二醇抗体
淀粉样蛋白β前体样蛋白2抗体
淀粉样蛋白β前体样蛋白1抗体
转录激活蛋白crsp70抗体
 

原创作者:上海莼试生物技术有限公司

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