• 13585831301
  • 021-59541103 021-60443211
  • 3004967995

联系我们

联系人: 021-59541103 021-60443211

电话:021-59541103 021-60443211

手机:13585831301

E-mail:3004967995@qq.com

详细地址: 上海市嘉定区澄浏公路52号中科院技术转移中心24号楼

技术服务

大鼠小肠粘膜组织提取物操作流程

阅读:362     发布时间:2022/10/13 15:56:50

大鼠小肠粘膜组织提取物操作流程:
1.1主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线。
大鼠胰岛细胞完全培养基
大鼠胰腺星状细胞完全培养基
大鼠胰腺导管上皮细胞完全培养基
大鼠颌下腺上皮细胞完全培养基
大鼠腮腺细胞完全培养基
大鼠乳腺上皮细胞完全培养基
大鼠胰腺上皮细胞完全培养基
大鼠甲状腺上皮细胞完全培养基
大鼠淋巴管内皮细胞完全培养基
大鼠淋巴成纤维细胞完全培养基
大鼠外周血白细胞完全培养基
大鼠骨髓基质细胞完全培养基
大鼠食管上皮细胞完全培养基
大鼠食管平滑肌细胞完全培养基
大鼠肠平滑肌细胞完全培养基
大鼠肠粘膜上皮细胞完全培养基
大鼠肠动脉内皮细胞完全培养基
大鼠肠静脉内皮细胞完全培养基
大鼠肝实质细胞完全培养基
大鼠肝动脉内皮细胞完全培养基
大鼠肝动脉平滑肌细胞完全培养基
大鼠小肠血管内皮细胞完全培养基
大鼠小肠隐窝上皮细胞完全培养基
大鼠肝内胆管上皮细胞完全培养基
大鼠胃粘膜上皮细胞完全培养基
大鼠肝窦内皮细胞完全培养基
大鼠肝星形细胞完全培养基
大鼠直肠平滑肌细胞完全培养基
大鼠小肠平滑肌细胞完全培养基
 

原创作者:上海莼试生物技术有限公司

品牌中心更多>