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10种病原体PCR检测试剂盒PCR实验步骤
阅读：340 发布时间：2023/4/24 14:42:19
10种病原体PCR检测试剂盒PCR实验步骤：①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
嗜水气单胞菌
肺炎链球菌
产气肠杆菌
肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种
奇异变形杆菌
化脓性链球菌
阴沟肠杆菌阴沟亚种
嗜热脂肪地芽孢杆菌
嗜热链球菌
费氏志贺氏菌（福氏志贺氏菌)
Hyphomonas adhaerens
脱硫弧菌脱硫亚种（脱硫微螺菌、脱硫螺菌、脱硫杆菌、脱硫芽孢弧菌、脱硫弧菌）
厌氧消化链球菌
铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)
纤维纤维微菌
长野解普鲁兰杆菌
变异链球菌
人苍白杆菌
戊糖乳杆菌
菊糖芽孢乳杆菌
豇豆慢生根瘤菌
长双歧杆菌
鳆发光杆菌
斯氏梭菌
嗜盐四联球菌
海苏特氏菌
耐久肠球菌(坚韧链球菌)
海氏肠球菌
盲肠肠球菌
伴放线放线杆菌
类干酪乳杆菌类干酪亚种
嗜肺军团菌
谷氨酸棒状杆菌（黄色短杆菌）
发酵纤维单胞菌
长赤细菌
海洋盐单胞菌
Georgenia muralis
河流弧菌
原创作者：上海莼试生物技术有限公司
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![人胚肾细胞；293 [HEK-293]](http://img5.zhihuilv.com/223/Products/Small/20190314/201903141023106619.jpg)
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