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技术服务

贴壁细胞：

1.被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中，接种密度为1-2×104。同时，接种正常无支原体感染的同种细胞，作为阴性对照。

2.5天后，先吸去培养液，再加入1ml的固定液，静置20min，

3.吸去固定液，晾干。

4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞)，37℃避光放置15-20min或室温静置20～30min。

5.吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml灭菌超纯水洗涤三次，直接风干。风干后加入一滴封片液，并以盖玻片覆盖。

6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。

悬浮细胞：

1.收集需检测的细胞，1500rpm，5min。

2.将收集的细胞涂片于载玻片上，再加1ml的固定液，静置20min。

3.吸去固定液，晾干。

4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞)，37℃避光放置15～20min或室温静置20～30min。

5.吸去Hoechst 33258工作液，用无菌水洗涤玻片3次，直接风干。风干后加入一滴封固液，并以盖玻片覆盖。

6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。

结果判读

在完成上述步骤后，我们需要对实验结果进行判读。根据试剂盒的说明书，观察反应孔中的颜色变化或荧光信号强度，与标准曲线或对照品进行比较，从而判断样本中支原体的存在与否。

实验记录与数据分析

在进行支原体检测过程中，务必做好实验记录，包括样本信息、实验步骤、反应条件、结果判读等信息。实验结束后，对实验数据进行整理和分析，以便后续的数据处理和结果解读。

质量控制与注意事项

为确保支原体检测结果的准确性和可靠性，我们需要严格遵守实验操作规程，确保试剂、耗材和设备的质量。同时，定期对实验过程进行质量控制，包括试剂的批次差异、操作人员的技能水平等因素。在实验过程中，还需注意避免交叉污染、误操作等可能导致结果偏差的因素。

总结

支原体检测试剂盒的操作步骤包括样本采集、样本处理、试剂准备、加样与反应、结果判读、实验记录与数据分析以及质量控制与注意事项。通过遵循这些步骤，我们可以有效地利用支原体检测试剂盒进行支原体的快速、准确检测，为临床诊断和治疗提供有力支持。

在实际操作过程中，我们需要关注实验细节，严格遵守操作规程，确保实验结果的准确性和可靠性。同时，不断总结经验，提高实验技能，为支原体检测工作提供更好的技术支持。

原创作者：上海莼试生物技术有限公司