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大量制备单克隆抗体的方法有两类

阅读：583 发布时间：2019/7/10 11:37:06

经过反复克隆化获得的抗体阳性杂交瘤细胞株应立即扩大培养（除及时冻存的细胞外）。因多次传代易引起染色体逐渐丢失而使细胞产生抗体能力逐渐减弱甚至消失，还应尽早使用获得的抗体阳性杂交瘤细胞株制备单克隆抗体。

大量制备单克隆抗体的方法有两类，一类是动物体内诱生法，另一类是体外培养法

（一）体外培养法

将杂交瘤细胞接种到培养瓶中，在5％C02，37℃孵箱中培养数天后，收集上清液，离心去除细胞和碎片。本法所得抗体含量不高，为5—25pg／m1。但仍可满足部分实验的要求。另一种是杂交瘤细胞高密度培养，分两种类型：一类是悬浮培养系统，即采用转瓶或发酵罐式的生物反应器；另一类是细胞固定化培养系统，包括中空纤维细胞培养系统和微囊化细胞培养系统。高密度培养可使单位体积单克隆抗体含量明显增加，产量可达lg／L。

（二）体内诱生法

接种动物常选用BALB／c小鼠或与BALB／c小鼠杂交的Fl代小鼠。接种前l周左右，于小鼠腹腔内注入降植烷或医用液状石蜡0．5ml。每次小鼠腹腔注射0．5X106一1X106个杂交瘤细胞。接种后7—10天，小鼠腹部逐渐长大，诱生出腹腔肿瘤并产生含单克隆抗体的腹腔积液。接种后10一14天，可分次采集腹腔积液，1只可得10～20ml（5～20mg／m1）。收集到的腹腔积液，离心去除细胞，灭活（56℃30min），再次离心，取上清液，加入0．1％叠氮钠，分装保存于-20℃。如冻干保存，抗体效价可保持更久。

原创作者：上海莼试生物技术有限公司

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