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人抗EB病毒抗体(EBV)ELISA免费代测试剂盒说明书

阅读:144     发布时间:2022/8/12 15:24:08点击下载该文件

人抗EB病毒抗体(EBV)ELISA免费代测试剂盒说明书
 
 
试验原理:
 
是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。
分析类型:夹心ELISA
 
样本类型:血清、血浆、组织、尿液、及相关液体等样本
 
产品型式:48/96孔板,可拆
 
贮存方法:试剂盒未拆开,4℃保存。已拆开,标准品-20℃保存,其它4℃保存。
 
运输条件:4℃
 
样本体积:50μl
自备材料
 
1)蒸馏水。
 
2)酶标仪(450nm)
 
3)高精度加样及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
 
4)振荡器及磁力搅拌器等。5)37℃恒温箱。
 
 
安全性
 
1)避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
 
2)实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
 
3)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
 
 
样品收集、处理及保存方法
 
1)血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
 
2)血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
 
3)细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
 
4)组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
 
5)保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
 
 
试剂的准备
 
1)标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
 
2)洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。
 
 
操作步骤
 
1)使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
 
2)根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
 
3)加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
 
4)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
 
5)每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
 
6)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
 
7)每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
 
8)取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
 
9)在450nm波长处测定各孔的OD值。
 
 
 
局限
 
6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。
 
 
性能
 
1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
 
2. 特异性:不与其它细胞因子反应。
 
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
 
 
 
结果判断与分析
 
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
 
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的待测物质标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的待测物质含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
 
 
实验原理: 用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗体的微孔中依次加入标本或者标准品、生物素化的抗体、HRP-标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物显色。底物在过氧化物酶的催化下转化成蓝色, 并在酸的作用下转化成最终的黄色。 颜色的深浅和样品中的目标蛋白呈正相关。用酶标仪在(450nm)波长下测定测定OD值(吸光度),计算样品浓度。
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