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大豆凝集素（SBA）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒实验原理
阅读：319 发布时间：2019/5/17 15:29:16点击下载该文件
大豆凝集素（SBA）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中大豆凝集素（SBA）含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大豆凝集素（SBA）水平。用纯化的大豆凝集素（SBA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入大豆凝集素（SBA），再与HRP标记的大豆凝集素（SBA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的大豆凝集素（SBA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大豆凝集素（SBA）浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存
说明书 1份 1份
封板膜 2片（48） 2片（96）
密封袋 1个 1个
酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
标准品：900ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存
酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
浓缩洗涤液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存
标本要求：
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：
标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为600ng/L，400ng/L ，200ng/L，100ng/L， 50ng/L）。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项：
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
请每次测定的同时做标准曲线，zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
底物请避光保存。
严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围：
30ng/L -700ng/L
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
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