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小鼠4-羟基壬烯酸HNE酶联检测试剂盒测定步骤

阅读：588 发布时间：2020/9/10 16:21:12

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠4-羟基壬烯酸（4-HNE）水平。用纯化的小鼠4-羟基壬烯酸（4-HNE）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入4-羟基壬烯酸（4-HNE），再与HRP标记的4-羟基壬烯酸（4-HNE）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的4-羟基壬烯酸（4-HNE）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠4-羟基壬烯酸（4-HNE）浓度。
小鼠4-羟基壬烯酸HNE酶联检测试剂盒测定步骤

1.加样

1. 除包被外都需45度加样

2.加样体积要准确

3.管底加样，不能加在管壁上

4.加样时不能产生气泡

2.温浴

1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温度的水浴箱。

2.各ELISA板不应叠在一起。

3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿纱布的金属湿盒中。

4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。

3.洗涤

1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却是决定实验成败的关键。

2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或抗体结合的物质以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。

4.读板

1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般可采用目视比色。

2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质量和软件的算法。

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