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细胞毒性检测试剂盒（乳酸脱氢酶法）使用方法
阅读：644 发布时间：2021/4/19 16:10:11
细胞毒性检测试剂盒(乳酸脱氢酶法)使用方法：
一、样品的准备：
方法一：LDH释放检测
a.根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养板中，使待检测时细胞密度不超过80-90%满。
b.吸去培养液，用PBS液洗涤一次。换新鲜培养液(推荐使用含1%血清的低血清培养液或适当的无血清培养液)，将各培养孔分成如下几组：包括无细胞的培养液孔(背景空白对照孔)，未经药物处理的对照细胞孔(样品对照孔)，未经药物处理的用于后续裂解的细胞孔(样品最大酶活性对照孔)，以及药物处理的细胞孔(药物处理样品孔)，并做好标记。按照实验需要给予适当药物处理(如加入0-10μl左右特定的药物刺激，可设置不同浓度，不同处理时间，对照孔中需加入适当的药物溶剂对照)，继续按常规培养。到预定的检测时间点前1小时，从细胞培养箱里取出细胞培养板，在“样品最大酶活性对照孔”中加入试剂盒提供的LDH释放试剂，加入量为原有培养液体积的10%。加入LDH释放试剂后，反复吹打数次混匀，然后继续在细胞培养箱中孵育。
c.到达预定时间后，将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。分别取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。
方法二：细胞内总LDH的检测
a.细胞毒性检测：根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养孔板中，使待检测时细胞密度不超过80-90%满。加入不同药物进行处理，并设置适当对照。药物刺激完毕后，将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。尽量吸除上清，加入150μl 用PBS稀释了10倍的试剂盒提供的LDH释放试剂(10体积PBS中加入1体积LDH释放试剂并混匀)，适当摇晃培养板混匀，然后继续在细胞培养箱中孵育1小时。随后将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。分别取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。
b.细胞增殖检测：根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养孔板中，使促进细胞增殖的药物刺激后细胞不超过80-90%满为宜。使用不同的药物刺激细胞，并设置适当对照。药物刺激完毕后，将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。尽量吸除上清，加入150μl 用PBS稀释了10倍的试剂盒提供的LDH释放试剂(10体积PBS中加入1体积LDH释放试剂并混匀)，适当摇晃混匀，然后继续在细胞培养箱中孵育1小时。随后将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。分别取各孔上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。
注：LDH释放检测更加常用一些，细胞内总LDH检测通常可以使用MTT、WST-1或CCK-8等方法替代。
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