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HCT-8/VCR人结肠癌长春新碱耐药细胞株实验报告

阅读:416     发布时间:2022/7/12 15:45:06

 HCT-8/VCR人结肠癌长春新碱耐药细胞株实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,*将组织剪成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
      
二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,*在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
AKT1蛋白激酶B
ANGL2血管生成素样蛋白2抗体
Angiopoietin 4血管生成素3/血管生成素4抗体
Annexin I膜粘连蛋白 I抗体
Annexin A2膜粘连蛋白 Ⅱ抗体
ATF1活化转录因子1抗体
Aquaporin 4 水通道蛋白4抗体
ATF2活化复制因子2抗体
AMPK beta 1腺苷单磷酸活化蛋白激酶β1抗体
Amylin糖尿病相关肽/胰岛淀粉样肽抗体
Angiotensin II血管紧张素Ⅱ抗体
AT2R血管紧张素Ⅱ受体1抗体
Angiopoietin-1血管生成素-1抗体
Annexin V膜粘连蛋白5抗体
Annexin V重组膜粘连蛋白5抗体
alpha Adaptin衔接蛋白α-Adaptin抗体
APAF1(CT)凋亡蛋白活性因子-1抗体(C端)
APAF1(NT)凋亡蛋白活性因子-1抗体(N端)
ABCG2三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体
APOE载脂蛋白E抗体
Amyloid Precursor Protein淀粉样肽前体蛋白抗体
Aquaporin 2水通道蛋白-2抗体
AGT血管紧张素原抗体
Androgen receptor雄激素受体抗体
AVEN细胞死亡调节蛋白抗体(凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制剂)
 
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