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大豆源性成分PCR检测试剂盒 PCR-荧光探针法反应五要素

阅读:364     发布时间:2022/8/15 16:47:26

 大豆源性成分PCR检测试剂盒 PCR-荧光探针法反应五要素:

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:

①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。

②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-12抗体ADAMTS12
α-辅肌动蛋白4(内参)抗体alpha Actinin 4-Loading Control
碱性磷酸酶抗体Alkaline Phosphatase
AU1 tag标签抗体AU1 tag
脂肪细胞增强结合蛋白1AEBP1
蛋白激酶BAKT1
蛋白激酶BAKT1
血管生成素样蛋白2抗体ANGL2
血管生成素3/血管生成素4抗体Angiopoietin 4
膜粘连蛋白 I抗体Annexin I
膜粘连蛋白 Ⅱ抗体Annexin A2
活化转录因子1抗体ATF1
水通道蛋白4抗体Aquaporin 4 
活化复制因子2抗体ATF2
腺苷单磷酸活化蛋白激酶β1抗体AMPK beta 1
糖尿病相关肽/胰岛淀粉样肽抗体Amylin
血管紧张素Ⅱ抗体Angiotensin II
血管紧张素Ⅱ受体1抗体AT2R
血管生成素-1抗体Angiopoietin-1
膜粘连蛋白5抗体Annexin V
重组膜粘连蛋白5抗体Annexin V
衔接蛋白α-Adaptin抗体alpha Adaptin
 
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