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PCR-荧光探针法两种计算方法

阅读：1045 发布时间：2019/12/27 16:41:51

PCR-荧光探针法基本原理：通过大量对比某一种细菌或病毒的基因，得到该细菌或病毒共同保守序列，根据该序列设计特异性引物，通过PCR扩增，即可获得相应大小的片段，以此来检测该细菌或者病毒的感染/污染状态。

PCR-荧光探针法用RQ作统计量和△CT作统计量都是可以的，外文中使用这两种方法的都不少。

而且我实际计算过，实际上这两种方法算出来的有无统计学意义应该是相同的，但是注意P值会不同。

这其实问题不大，但是实际上，如果用△CT作统计量，基本很多时候它都是正态的，则需要使用参数检验，并且标准差小，这样有个好处就是如果是阴性结果的话，统计效能计算起来偏大。而如果用RQ作统计量，基本RQ大多都是非正态分布，并且标准差大，这样如果阴性结果的话，统计效能值与△CT法比会偏小，这样就很吃亏当需要解释统计效能时。

PCR-荧光探针法其次，如果是用RQ值做统计量，则在一张图中，无法同时显示多个基因的相对表达量。除非比如说你的B基因的RQ值计算还是以某一样本A基因作为Calibrator sample，虽然理论上用谁做统计结果都应该一样，但是说起来不好说，别人会问凭什么B基因用A基因的△CT值作归一。而是用△CT法则不牵扯到这个问题，因为大家都是和内参减的，可以直接多组比较并且放在图中。

因此我的感觉，只要是△CT法肯定被认可，则用△CT法是zui简单且zui方便的方法。但是从本质讲RQ值法更本质，因为△CT只是用来比较的，而不能代替原来自身的表达量，而RQ是2-△△CT，这其实才反应了样本检测基因的表达量，因为大家懂的，CT值是与拷贝数的对数存在线性关系。

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