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本试剂盒提供了一种在生理条件下通过荧光检测活细胞内一氧化氮合成酶活性的方法，不需要使用传统方法所需的放射性同位素。本试剂盒采用了可以穿透细胞膜的最新一代一氧化氮荧光检测探针DAF-FM DA(3-amino,4-aminomethyl-2',7'-difluorescein, diacetate)，在提供充足的底物的条件下检测细胞内的一氧化氮合成酶可以催化产生的一氧化氮量，从而检测出一氧化氮合成酶的活性。详细的检测原理参考图1。采用一些一氧化氮合成酶的抑制剂则可以测定出特定类型的一氧化氮合成酶的活性。例如，采用iNOS抑制剂，未加iNOS抑制剂测定出来的酶活力减去加了iNOS抑制剂测定出来的酶活力就是iNOS的酶活力。

本试剂盒是目前为止世界上最先进的一种一氧化氮合成酶检测试剂盒。和Calbiochem等多年前就开始提供的一氧化氮合成酶检测试剂盒相比无需使用同位素，和Sigma等最近推出的基于荧光的一氧化氮合成酶检测试剂盒相比采用了最新一代的荧光探针，灵敏度更高，特异性更好。本试剂盒的缺点是和其它荧光法一氧化氮合成酶检测试剂盒一样，仅能提供一氧化氮合成酶的相对活性。

本试剂盒和检测细胞内一氧化氮水平的不同之处在于提供了充足的底物L-Arginine和一些可以穿透细胞膜的反应辅助因子，确保一氧化氮合成酶的催化的一氧化氮合成不会受底物的量或辅助因子的量的限制，从而可以测定出细胞内一氧化氮合成酶活力。

本试剂盒最适合用于贴壁的细胞或组织的一氧化氮合成酶的检测，对悬浮细胞也可以进行检测。

试剂盒组份：

NOS检测缓冲液(2X)————15ml

精氨酸溶液————————600μl

NADPH——————————2.3mg

DAF-FM DA(5mM)——————20μl

注意事项：

1. RPMI 1640等含有较高浓度硝酸盐的培养液容易对本试剂盒的检测产生干扰，请尽量避免。

2. 由于检测过程中有还原反应，凡是影响还原反应的氧化或还原试剂要注意避免，例如常用的还原剂DTT和巯基乙醇。

3. DAF-FM DA在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。

储存条件：-20℃避光，有效期6个月。

一氧化氮合成酶检测试剂盒(荧光法)细胞生物学研究有以下几个方面。

细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。

原创作者：上海莼试生物技术有限公司

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一氧化氮合成酶检测试剂盒(荧光法)

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