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本试剂盒利用超氧化物可以还原WST-1产生可溶性有色物质为基础来检测超氧化物。本试剂盒的检测试剂中添加了Catalase(触酶)等，可以清除过氧化氢等过氧化物对WST-1显色的干扰，使测定结果更加准确。并且本试剂盒还提供SOD(超氧化物歧化酶)，可以验证本试剂盒测定出的结果是否为超氧化物，以排除检测体系中所用的一些试剂可能产生的干扰。对于本试剂盒，加入SOD后通常可以抑制90%以上的超氧化物。

WST-1是一种类似于MTT的化合物，可以被超氧化物还原生成橙色的formazan。超氧化物产生越多越快，则颜色越深，即相应测定得到的吸光度值越大。

使用WST-1作为检测试剂比用传统的细胞色素c(cytochrome c)检测超氧化物具有多方面的优点。首先，WST-1本身的吸光度非常低(通常OD450为0.02左右，因仪器和酶标板不同而有所不同)，而细胞色素c本身的吸光度非常高(通常OD550为0.5左右)，因此，使用WST-1与细胞色素c相比，检测灵敏度高很多倍。其次，WST-1的还原产物是稳定的可溶性产物，且对细胞基本无毒性，使WST-1方法更加适合于高通量的筛选。另外，细胞色素c法由于灵敏度的限制，一般不适合用96孔板测定，而WST-1法可以用96孔板测定，使检测更加便捷。用WST-1法或细胞色素c法对超氧化物测定效果比较参考图1。图1中，50万/毫升嗜中性粒细胞在37℃用PMA刺激指定时间，用WST-1或细胞色素c方法分别测定。WST-1法测定OD450，而细胞色素c法测定OD550。另外，WST-1法和luminol法相比，灵敏度相近，但仅须使用普通的酶标仪，无须使用luminol法所需的luminometer，并且检测速度也比luminol法更加快捷。

试剂盒组分：

超氧化物检测缓冲液————30ml

WST-1溶液—————————1ml

Catalase溶液———————200μl

SOD溶液——————————20μl

储存条件：-20℃，有效期一年。

超氧化物检测试剂盒细胞生物学研究有以下几个方面。

细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。

原创作者：上海莼试生物技术有限公司

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