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细胞色素b5(Cytochrome b5)含量测定试剂盒微量法100T/96S

  • 产品货号:CS-01S63563
  • 产品价格:电议
  • 产品产地:进口、国产
  • 包装类型:100T/96S
  • 采购热度:453
  • 库存:36
  • CAS号:
  • 方法:微量法
  • 含量:
  • 品牌名称:莼试
  • 分子式:
  • 分子量:

简介内容:细胞色素b5(Cytochrome b5)含量测定试剂盒质量可靠、价格优惠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点。

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标签:细胞色素b5(Cytochrome b5)含量测定试剂盒 

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产品名称

检测方法

规格

货号

细胞色素b5(Cytochrome b5)含量测定试剂盒

微量法

100T/96S

CS-0163563

 注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:

细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。细胞色素P450和细胞色素b5P450酶系的两个血红素蛋白,其比值的变化与P450代谢活性密切相关。

商品介绍:

测定原理:

氧化型细胞色素b5经连二亚硫酸钠还原后,在424nm处有最大吸收峰,通过测定424nm490nm处吸光值的差异,即可计算出细胞色素b5的含量。

自备仪器和用品:

普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:粉剂×2瓶,4℃保存。临用前各加100mL蒸馏水,充分溶解。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。

工作液配制:临用前配制,戴一次性手套,小心打开试剂三瓶盖,加试剂二20mL充分溶解,4℃避光可保存1周。

样品中细胞色素b5提取:

1、除去细胞核,线粒体等大分子物质:称约0.5g组织,加入1mL试剂一,冰上充分研磨,10 000g 4℃离心30min,取上清液,转入超速离心管中。

2、粗制微粒体:100 000g4℃离心60min,弃上清液。

3、除血红蛋白等杂质:向步骤2的沉淀中加1mL试剂一,盖紧后充分震荡溶解,100 000g离心30min,弃上清液。

4、待测液:向步骤3的沉淀中加试剂二0.5mL,盖紧后充分震荡溶解,即待测液,该待测液需当天测定。

细胞色素b5含量测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min

2. 工作液置于25℃水浴中预热30 min

3. 空白管:取1mL玻璃比色皿,加入10 μL蒸馏水,200μL工作液,室温静置2 min424nm490nm处吸光值,424nm处吸光值记为A空白管1490nm处吸光值记为A空白管2。△A空白管= A空白管1- A空白管2

4. 测定管:取1mL玻璃比色皿,加入10 μL待测液,200μL工作液,室温静置2 min424nm490nm处吸光值,424nm处吸光值记为A测定管1490nm处吸光值记为A测定管2

A测定管= A测定管1- A测定管2

注意:只需要做一个空白管。

样品细胞色素b5含量计算公式:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1)按蛋白浓度计算

细胞色素b5含量(nmol/mg prot) = (A测定管-A空白管)÷(ε×d)×V反总÷(Cpr×V样)

= 122.8×(A测定管-A空白管)÷Cpr

2)按样本质量计算

细胞色素b5含量(nmol/g 鲜重)= (A测定管-A空白管)÷(ε×d)×V反总×(V样总÷V样)÷W

= 61.4×(A测定管-A空白管)÷W

ε:还原型细胞色素b5纳摩尔消光系数,171×10-6 L/nmol/cmd:比色皿光径(cm),1cm V反总:反应体系总体积,210 μL =2.1×10-4 LCpr:待测液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V样:加入反应体系中待测液体积,10 μL=0.01 mLV样总:待测液总体积,0.5 mLW:样品质量(g)。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

1)按蛋白浓度计算

细胞色素b5含量(nmol/mg prot) = (A测定管-A空白管)÷(ε×d)×V反总÷(Cpr×V样)

= 245.6×(A测定管-A空白管)÷Cpr

2)按样本质量计算

细胞色素b5含量(nmol/g 鲜重)= (A测定管-A空白管)÷(ε×d)×V反总×(V样总÷V样)÷W

= 122.8×(A测定管-A空白管)÷W

ε:还原型细胞色素b5纳摩尔消光系数,171×10-6 L/nmol/cmd96孔板光径(cm),0.5cm V反总:反应体系总体积,210 μL =2.1×10-4 LCpr:待测液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V样:加入反应体系中待测液体积,10 μL=0.01 mLV样总:待测液总体积,0.5 mLW:样品质量(g)。

注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原创作者:上海莼试生物技术有限公司

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1、报价含普票、运费。

2、常用试剂备货充足,除对温度要求极其严格的产品当天可发货。

  

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