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细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至405 nm。

2、在EP管中加入下列试剂

CAT活性计算：

1、标准曲线：y = 0.18x + 0.0013 R2 = 1 x：体系中过氧化氢浓度变化值（μmol/mL）

y：吸光值差值ΔA

2、血清（浆）CAT活力的计算:

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化1μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(μmol /min/mL)= =(ΔA-0.0013)÷0.18×V反总÷V样÷T

=222.22×(ΔA-0.0013)

3、组织、细菌或细胞中CAT活力计算：

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化1μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0013)÷0.18×V反总÷(V样×Cpr) ÷T

=222.22×(ΔA-0.0013)÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织每分钟催化1μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(μmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0013)÷0.18×V÷（W× V样÷V样总）÷T

=222.22×(ΔA-0.0013)÷W

V反总：反应体系总体积，1.2 mL；V样：加入样本体积，0.015 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。

注意事项：

1、预实验若发现酶活性过高（A测定＜0.1），可用提取液适当稀释样品后测定，并在计算公式中乘以相应稀释倍数。

2、若A空白＜A测定，一方面可能是酶活性过低，可将反应时间2延长到5min,另一方面可能样本中杂质干扰严重，可将样本稀释5倍左右后测定，并在计算公式中代入实际反应时间和乘以相应稀释倍数。

注意：

1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原创作者：上海莼试生物技术有限公司

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过氧化氢酶（Catalase，CAT）试剂盒（钼酸铵比色法）分光光度法50管/48样

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