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细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）或果汁样本的处理：

按照血清（浆）或果汁体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议取0.1mL血清（浆）或果汁加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至525nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）

PPO活性计算：

1、血清（浆）或果汁PPO活性

单位的定义：每分钟每mL血清（浆）或果汁在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化

0.01为一个酶活力单位。

PPO（U/mL）=ΔA×V反总÷(V液× V样÷V样总)÷0.01÷T =60×ΔA÷V液

2、组织、细菌或细胞PPO活性

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化0.01为一个

酶活力单位。

PPO（U/mg prot）=ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.01÷T =60×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

（2）按样本鲜重计算：

单位定义：每分钟每g组织在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化0.01为一个

酶活力单位。

PPO（U/g 鲜重）=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T =60×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位定义：每分钟每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化0.01为一个酶活力单位。

PPO（U/104 cell）=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T =0.12×ΔA

V反总：反应体系总体积，1.08mL；V液：加入血清（浆）或果汁体积，0.1mL；V样：加入样本体积，0.18mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，10 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。

注意：

1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原创作者：上海莼试生物技术有限公司

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多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）试剂盒分光光度法50管/24样

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