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产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
磷脂酶D( Phospholipases D,PLD )试剂盒 | 微量法 | 100T/96S | CS-01S63838 |
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
磷脂酶D(EC
测定原理
磷脂酶D催化水解磷脂酰胆碱末端的磷脂酰二酯键生成磷脂酸和胆碱,胆碱在胆碱氧化酶催化作用下生成甜菜碱和过氧化氢,过氧化氢在过氧化氢酶的作用下将4-氨基安替比林和重蒸酚氧化成粉红色物质,在500nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅、无水乙醇。
试剂组成和配制
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体102mL×瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体3mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂三:粉剂×1支,-20℃避光保存。临用前加1mL无水乙醇充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四:液体15mL×1瓶,4℃避光保存。
标准品:液体1mL×1支,4℃避光保存。
酶液提取
1.组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心5min,取全部上清于4℃、100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1mL试剂一。
2.细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后于4℃,10000g离心5min,取全部上清于4℃、100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1mL试剂一。
3.血清:直接测定。
测定操作
酶活计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义:每毫克蛋白每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。
PLD活性(nmol/min /mg prot)= ×C标准÷Cpr÷T= 16.7×÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义:每克组织每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。
PLD活性(nmol/min /g 鲜重)= ×C标准÷W÷T = 16.7×÷W
3.按照细胞数量计算
酶活性定义:每104个细胞每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。
PLD活性(nmol/min /104 cell)= ×C标准÷细胞数量÷T = 16.7×÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活性定义:每毫升血清每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。
PLD活性(nmol/min /mL)= ×C标准÷T=16.7×
C标准:标准品浓度,500nmol/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g/mL;T:反应时间,30min
b.用96孔板测定的计算公式如下
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义:每毫克蛋白每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。
PLD活性(nmol/min /mg prot)= ×C标准÷Cpr÷T= 16.7×÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义:每克组织每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。
PLD活性(nmol/min /g 鲜重)= ×C标准÷W÷T = 16.7×÷W
3.按照细胞数量计算
酶活性定义:每104个细胞每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。
PLD活性(nmol/min /104 cell)= ×C标准÷细胞数量÷T = 16.7×÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活性定义:每毫升血清每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。
PLD活性(nmol/min /mL)= ×C标准÷T=16.7×
C标准:标准品浓度,500nmol/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g/mL;T:反应时间,30min
注意事项
1.显色完成后,若有沉淀,于8000rpm,25℃离心5min后取上清测定。
2.吸光值不宜超过1,否则用试剂一将酶液进行稀释,并在计算公式中乘以稀释倍数。
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原创作者:上海莼试生物技术有限公司
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