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产品属性:
产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
人端粒酶活性荧光实时定量PCR法检测试剂盒 | Human Telomerase Activity SYBR Green Real-time qPCR Kit | 20T|50T | CS-01F99246 |
端粒是真核生物染色体末端特殊的DNA-蛋白结构,含多个重复序列(5'-TTAGGG-3'),端粒结构的形成和功能的维持需要端粒结合蛋白的直接或间接参与。端粒酶是细胞体内一种核糖核蛋白复合体,是由RNA和蛋白质亚基组成的一种特殊的逆转录酶,其可以利用自身的RNA模板合成末端DNA,并添加到染色体末端以克服末端序列的丢失,从而使细胞获得增殖能力。
端粒酶蛋白催化亚基(TERT或TRT)具有反转录酶的主要特征,其表达在正常细胞中受到抑制,研究表明,TERT或TRT的表达与端粒酶活性的表达一致,与端粒酶的活化程度密切相关。Wisman等在人卵巢癌中利用逆转录PCR检测hTERT的mRNA的表达,并采用TRAP法检测端粒酶活性,结果证实二者均存在于恶性肿瘤中并且表达模式相同。基于上述原理,实时荧光定量PCR端粒酶检测试剂盒通过检测TERT的mRNA表达水平来间接反应端粒酶的活性。 实时荧光定量PCR(SYBR Green Real-time PCR)方法以其卓越的快速性及定量性被广泛应用于科研领域,使用本试剂盒可以准确简便地进行mRNA的表达分析。试剂盒采用SYBR Green qPCR Master Mix为荧光实时定量PCR和Two-Step荧光实时定量PCR设计的最优反应体系,并结合特异性的细胞端粒酶催化亚基基因TERT引物,简化实验步骤和提高实验效率。Master Mix含有Maxima Hot Start Taq DNA聚合酶、dNTPS、进行优化处理的PCR反应缓冲液以及SYBR Green染料。使用Hot Start Taq DNA聚合酶,为PCR反应提供了更高的产量和灵敏度、特异性,能够检测低至10个拷贝的目的基因。 本试剂盒适应于大多数的Real-time PCR扩增仪,包括Applied Biosystems,Eppendorf,Corbett,Bio-Rad,Roche,杭州博日(Line-GeneBioer)等品牌的PCR扩增仪。 备注: 建议采用25μL的实验体系,如果改变请参照其余说明进行调整。 主反应混合液Master mix含有除模板、引物外的全部组分,避免其反复冻融和污染是进行一个成功实时定量PCR反应的重要步骤。 PCR扩增仪设定时需要建立起始10分钟、95℃的变性程序以激活Maxima Hot Start DNA聚合酶。 一般实时定量实验中采用适宜体系确保Maxima qPCR Master Mix的最小化,避免产生大量的荧光强度。 针对不同实验条件和仪器型号重新调整荧光阈值。 |
原创作者:上海莼试生物技术有限公司
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