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其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中提供的7-AAD可用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。7-AAD是一种核酸染料，同PI有着相似的荧光特性，但其发射光谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI的最佳替代品，可与Annexin V联合使用。该染料不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可穿透晚期凋亡细胞或者坏死细胞并与其内的DNA结合。因此将Annexin V-APC与7-AAD联合使用时，7-AAD则被排除在活细胞（Annexin V-/7-AAD-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/7-AAD-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Annexin V-APC和7-AAD结合染色呈现双阳性（Annexin V+/7-AAD+）。

试剂盒组份：

重组人Annexin V/APC*（rh Annexin V/APC）———100µl

7-AAD Viability Staining Solution——————100µl

1×Binding buffer——————————————10ml

注意事项

1）试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2） 7-AAD为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等；

3）推荐使用悬浮培养细胞。若是贴壁细胞，建议使用不含EDTA的胰酶消化，如果消化不当，可能引起假阳性；若用细胞刮子则会造成细胞黏连成团而影响检测。可将胰酶消化后的细胞保存于含2% BSA的PBS中，防止进一步的损伤。

4）本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1×105，不推荐用于组织样本检测。

5）请勿固定样品，细胞固定后可能导致荧光的猝灭；

6）因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡细胞处理的细胞作为阴性对照，并进行荧光补偿的调节。

7）如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并低速离心（200×g）洗去血小板，然后用Annexin V结合缓冲液清洗细胞，以避免残留的EDTA会螯合Ca2+。

8） Annexin V-APC和7-AAD是光敏物质，在操作时请注意避光。

9）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：4℃，有效期一年。

AnnexinV-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒 细胞生物学研究有以下几个方面。

细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。

原创作者：上海莼试生物技术有限公司

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