产品目录

碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种常用的细胞核荧光染料，作为一种溴化乙锭（EB）的类似物，能够嵌入碱基对之间实现与双链DNA结合。PI经488 nm荧光激发，产生相对较大的斯托克司频移后，并在617 nm处具有大发射波长。另外，PI不能穿透细胞膜而被排斥在活细胞外，但是可以穿过破损的细胞膜而对核染色。利用以上特性，PI可作为细胞活力分析的荧光探针之一。不仅可单独使用；也可以同Calcein-AM、Hoechst 33258或Hoechst 33342等活细胞荧光探针一起使用，同时对活细胞和死细胞染色和鉴定。也能够与488 nm激发的荧光素如FITC和PE等联合使用。

使用方法

1）收集细胞，计数，高以1 x 106 cells/100 μl的量加入FACS分选管；

2）加2ml PBS（或HBSS）清洗细胞，300 x g离心5 min，去上清。重复一次。

注：若需要用抗体标记表面抗原，可在此步之后进行。PI不适合与检测胞内分子的抗体联合使用。

3）细胞清洗后，用100 μl流式细胞染色缓冲液（flow cytometry staining buffer）重悬细胞；加入10 μl PI染色液，轻柔混匀，冰上或者室温避光孵育10-15 min。

4）直接上机进行流式分析。注：PI染色后不可再清洗细胞。PI染色孵育后尽快上机检测。

注意事项

1）碘化丙啶（PI）是已知的诱变剂，操作过程中一定要做好防护工作避免与PI的直接接触。另外PI溶液在丢弃之前需要先经过活性炭处理。

2）流式细胞染色缓冲液可配制如下：1×PBS (w/o Ca2+ and Mg2+) + 0.5-1% BSA（或 5% FBS）＋0.1% 叠氮钠。也可根据实验室自身体系调整。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件：4℃，有效期半年

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作步骤:

1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

原创作者：上海莼试生物技术有限公司

在线咨询

留言注意事项：

1.遵守中华人民共和国有关法律、法规，尊重网上道德，承担一切因您的行为而直接或间接引起的法律责任。

2.请您真实的反映产品的情况,不要捏造、诬蔑、造谣。如对产品有任何疑问,也可以留言咨询。

3.未经本站同意，任何人不得利用本留言簿发布个人或团体的具有广告性质的信息或类似言论。

您感兴趣的产品*
您的单位*
联系人*
联系电话*
详细地址*
常用邮箱*
请输入您对我们的意见或建议*
验证码*

订货流程

产品订购说明:

1、报价含普票、运费。

2、常用试剂备货充足，除对温度要求极其严格的产品当天可发货。

3、进口原装产品要3-6周的货期，详细情况请咨询客服。

4、订货时间为工作日每周一至周五16:00之前。

5、如需代为检测，标本对环境温度高，可联系客服安排专人取样（限省内客户）。

6、代测免收代测费，一周出结果。

7、产品因运输途中包装破损请拒绝签收，做退回。我们将在24小时之内为您补发损坏产品。

8、如因单位财务制度原因，可申请先发货，报账后付款（此条款仅限医院、学校信誉良好客户）。

付款方式

普票汇款信息

账户名：上海生物

开户行：中国银行山东省分行营业部

账号：2169 2341 6278

为方便广大客户办理货款我公司提供多个银行的账户，学校、医院客户购买产品如因单位财务制度原因可先发货待报账后汇款，请及时告知销售人员已做具体操作。

碘化丙啶(PI)染液(即用型)

产品目录

联系我们

技术服务

商品详情购物流程代测服务付款方式常见问题

在线咨询

同类产品

订货流程

付款方式