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产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
蔗糖磷酸合成酶(Sucrose phosphate synthase,SPS)试剂盒 | 分光光度法 | 50管/24样 | CS-01S63544 |
蔗糖不仅是重要的光合产物,也是植物体内运输的主要物质,还是碳水化合物的贮存形式之一。SPS(EC
测定原理
蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸,蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在480nm下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。
需自备的的仪器和用品
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制
提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体4mL×1瓶,-20℃保存;
试剂二:1000μg/mL蔗糖溶液10mL×1瓶,4℃保存;
试剂三:液体3mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体40mL×1瓶,4℃保存;
试剂五:液体12mL×1瓶,4℃避光保存;
样品测定的准备
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
SPS活力单位的计算
1、按照蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS活性(μg /min/mg prot)= C标准管×V1×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
2、按照样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS活性(μg /min /g鲜重) = C标准管×V1×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
C标准管:标准管浓度,1000μg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.03mL; V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;T :反应时间:10min。
原创作者:上海莼试生物技术有限公司
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