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产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
二胺氧化酶(Diamine Oxidase,DAO)试剂盒 | 微量法 | 100T/48S | CS-01S63800 |
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
DAO(EC
测定原理:
DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢,外源添加过量的辣根过氧化物酶,催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成氧化型邻联茴香胺,在460nm处有特征吸收峰,通过测定该波长吸光度增加速率,计算DAO活性。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体120mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体0.3mL×1支,4℃保存。
试剂二:液体2.5mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体1.2mL×1管,4℃保存。
粗酶液提取:
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心20min,取上清,置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3.血清等液体:直接测定。
测定操作表:
1、分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至460nm,蒸馏水调零。
2、操作表
酶活性计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按样本蛋白浓度计算:
酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每毫克组织蛋白每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量为一个酶活力单位(U)。
DAO活性(nmol/min/mg prot)= ×V反总÷(V样×Cpr)÷T= 18×A460÷Cpr
(2)按样本质量计算:
酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每克组织每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO活性(nmol/min/g 鲜重)= ×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T= 18×A460÷W
(3)按细胞数量计算:
酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每104个细胞每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO活性(nmol/min/104cell)= ×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T= 18×A460÷细胞数量
(4) 按液体体积计算
酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每毫升血清每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO活性(nmol/min/mL)= ×V反总÷V样÷T= 18×A460
ε:氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数:7.5 L/mmol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应中样本体积,0.05mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min
b. 用96孔板测定的计算公式如下
(1)按样本蛋白浓度计算:
酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每毫克组织蛋白每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量为一个酶活力单位(U)。
DAO活性(nmol/min/mg prot)= ×V反总÷(V样×Cpr)÷T= 36×A460÷Cpr
(2)按样本质量计算:
酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每克组织每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO活性(nmol/min/g 鲜重)= ×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T= 36×A460÷W
(3)按细胞数量计算:
酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每104个细胞每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO活性(nmol/min/104cell)= ×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T= 36×A460÷细胞数量
(4) 按液体体积计算
酶活性定义:在pH7.2,温度为37℃条件下,每毫升血清每分钟催化产生1nmol H2O2所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO活性(nmol/min/mL)= ×V反总÷V样÷T= 36×A460
ε:氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数:7.5 L /mmol/cm;d:96孔板光径,0.5cm;V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应中样本体积,0.05mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min
注意事项:
1、如果OD值小于0.01,适当加大提取用样本量;OD值大于0.8,粗酶液可适当稀释,或者减少提取用样本量。
2、样品蛋白质含量需要另外测定。
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原创作者:上海莼试生物技术有限公司
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