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产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
多功能氧化酶((mixed function oxidase,MFO)试剂盒 | 微量法 | 100管/96样 | CS-01S63801 |
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定原理:
MFO催化对硝基苯甲醚产生对硝基苯酚,在400nm下有特征吸光值。
自备用品:
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96孔板、研钵、冰、蒸馏水、氯仿。
试剂组成和配制:
提取液:液体120mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体24mL×1瓶,4℃避光保存;
试剂二:粉剂×3管,-20℃保存;临用前取一管加入1.5mL水溶解,现配现用。
试剂三:液体24mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体64mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
按照组织质量(g):提取液(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心20min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、酶标仪预热30min以上,调节波长至400nm。
2、在EP管中依次加入如下试剂
MFO活性计算:
标准曲线:y = 0.0119x + 0.0021,R2 = 0.9997;y,吸光度;x,标准品浓度,单位nmol/mL。
(1)按样本质量计算
单位定义:每g样本每分钟产生1nmol对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
MFO(nmol/min/g 鲜重)=(△A-0.0021)÷0.0119×V总÷(V样÷V样总×W)÷T
=8.4×(△A-0.0021)÷W
(2)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
MFO(nmol/min/mg prot)=(△A-0.0021)÷0.0119×V总÷(V样×Cpr)÷T
=8.4×(△A-0.0021)÷Cpr
V总:最终萃取液体积,0.6 mL;V样:反应中样品体积,200μL;T:反应时间,30min;W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL。
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
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原创作者:上海莼试生物技术有限公司
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