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产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
单宁含量试剂盒 | 微量法 | 100管/96样 | CS-01S63806 |
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
单宁是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物,又称植物多酚。具有独特的化学性质和多种生理活性,如能与蛋白质、生物碱、多糖结合;能与多种金属离子发生络合或静电作用;具有止血、抑制微生物、抗过敏、抗突变、抗肿瘤、抗衰老等生理活性。
测定原理:
单宁在碱性环境下与磷钼酸反应,生成蓝色化合物,在760nm处有最大吸收峰。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体4mL× 1瓶,4℃保存;
试剂二:液体3mL × 1瓶,4℃保存;
单宁的提取:
按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL蒸馏水),充分匀浆后转移到EP管中,80℃水浴提取30min, 8000 g,25℃离心10 min,取上清液待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至760nm处,蒸馏水调零;试剂一和试剂二37℃预热10min以上;
2、操作表:
单宁含量计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下:
1、标准条件下测定的回归方程为y = 1.6418x +0.0134;x为标准品浓度(mg/mL),y为ΔA(A测定-A对照)。
2、按样本鲜重计算:
单宁含量(mg /g鲜重)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷(W×V1÷V2)=0.609×(ΔA-0.0134) ÷W。
3、按样本蛋白浓度计算:
单宁含量(mg/mg prot)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷(V1×Cpr)=0.609×(ΔA-0.0134) ÷Cpr。
V1:加入样本体积,0.005mL;V2:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
b.用96孔板测定的计算公式如下:
1、标准条件下测定的回归方程为y = 0.8209x+0.0134;x为标准品浓度(mg/mL),y为ΔA(A测定-A对照)。
2、按样本鲜重计算:
单宁含量(mg/g鲜重)=[(ΔA-0.0134)÷0.8209×V1]÷(W×V1÷V2)=1.218×(ΔA-0.0134) ÷W。
3、按样本蛋白浓度计算:
单宁含量(mg/mg prot)= [(ΔA-0.0134)÷0.8209×V1]÷(V1×Cpr)=1.218×(ΔA-0.0134)÷Cpr。
V1:加入样本体积,0.005mL;V2:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
注意:
1、ΔA控制在0.02-0.5范围内,若ΔA大于0.5,将样本提取上清液用蒸馏水稀释10倍后检测,计算公式中乘以相应稀释倍数。
2、标准曲线线性范围为:0.025mg/mL-0.5mg/mL。
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原创作者:上海莼试生物技术有限公司
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