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产品属性：

产品名称	英文名称	规格	货号
微量样品核酸提取试剂盒	Minute Amounts Of DNA-RNA Isolation Kit	50次	CS-01F99064

介绍

本产品是是专门用于从各种微量和痕量样品中提取DNA和RNA的试剂盒。

特点：

1. 核酸的回收率高，可以达到90%以上，可以跟QIAGEN的同类产品媲美。

2. 一管式操作，减少了样品污染的可能。

3. 一站式套装，除样品外客户不需要准备任何试剂，降低了实验误差。

4. 安全无毒，不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。

5. 可以处理各种形态的样品，包括液体样品，单个或少量的细胞，微小胚胎等等。

6. 与PCR、荧光PCR、RT-PCR、荧光RT-PCR 等后续反应兼容。

7. 试剂稳定，可以长期放置。

保存条件：常温（溶液A超过6个月的存放需要4℃保存），有效期一年。溶液B和溶液C具有挥发性，使用后需要将瓶盖拧紧。

使用方法：

1. 将不超过0.1mL的样品转移到自备的1.5mL 旋盖塑料离心管中。

2. 加入0.3mL 溶液A，盖上盖子后振荡3-5 秒。注意溶液A 是否有结晶沉淀（一般低温放置就会产生沉淀），如果有则必须在用前37℃-65℃水浴，直到沉淀溶解并充分摇匀后方可使用。

3. 室温静置10分钟。

4. 加入0.4mL 溶液B，盖上盖子后振荡3-5 秒。

5. 15,000g室温离心15分钟。强烈建议在离心管管壁上用记号笔做简单标记以区别离心面和向心面。

6. 小心移弃上清。注意不要触及离心面管底的核酸沉淀（此可见沉淀含有样品中的核酸和助沉剂，所见部分主要是助沉剂。微量核酸沉淀本身太少，肉眼是看不见的）。

7. 加入1.0mL 溶液C，振荡数秒后15,000 g 室温离心5分钟。注意：将离心管放入离心机时一定要将离心面向外。

8. 小心移弃上清。注意不要触及离心面管底的核酸沉淀。

9. 短暂离心数秒。注意：将离心管放入离心机时一定要离心面向外。

10. 小心移弃残留上清（残留的溶液C 会影响后续反应）。此时管壁（离心面方向）上将有可见的膜状沉淀。

11. 加入100 μL RNA 洗脱液，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁的膜状沉淀，使其溶解。溶解液如果混浊或有少量不溶物是正常现象，不溶沉淀物中就裹含有核酸。
12. 直接取适量样品用于PCR 或RT-PCR，也可短期保存于-20℃或-80℃。

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作步骤:

1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

原创作者：上海莼试生物技术有限公司

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微量样品核酸提取试剂盒